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宜明昂科CD47/SIRPα、PD-1/PD-L1、VEGF/VEGFR活性检测技术平台

  CD47/SIRPα通路检测技术平台


一、背景知识

SIRPα是信号调节蛋白家族(signal regulatory proteins, SIRPs)中典型的抑制性受体,可与体内广泛存在的跨膜糖蛋白CD47相互作用,传递抑制性信号。CD47广泛表达于多种肿瘤细胞,肿瘤细胞可通过CD47-SIRPα信号通路逃逸巨噬细胞的免疫监视。因此通过CD47抗体或受体阻断CD47SIRPα的结合可以激活巨噬细胞对肿瘤的吞噬作用,以及DC细胞的抗原递呈作用。


AICD(Activation-induced cell death)即活化诱导的细胞死亡,激活的效应淋巴细胞在行使效应功能后死亡的现象。通过T细胞-B细胞或T细胞-T细胞之间的FasL(CD95L)Fas(CD95)的结合,启动AICD,使自身反应性T细胞或B细胞被消除。




二、方法介绍

600全讯白菜网址大全,老虎机送免费彩金98,下载app领彩金37具有自主知识产权的Jurkat-CSR细胞株,表达CSR分子,该分子由SIRPα的膜外端、CD8 alpha的绞链区、CD28的穿膜区及胞内区、以及CD3z的信号传导区等所组成。


该细胞能与CD47蛋白特异性结合,结合后一定时间内可以启动信号传导并通过细胞间的FasL(CD95L)Fas(CD95)的结合,启动活化诱导细胞死亡机制(Activation-induced cell death, AICD),诱导细胞发生死亡。而加入CD47或者SIRPa抗体则可以抑制CD47Jurkat-CSR细胞的活化,阻止细胞死亡的发生。该嵌合蛋白细胞株可以用来检测CD47/SIRPα阻断剂的细胞生物学活性功能,用于CD47或者SIRPα特异性分子药物(单克隆抗体、基因重组蛋白、靶向性小分子药物等)的筛选。






三、检测流程

Jurkat-CSR细胞饲养铺板,加入CD47-Fc,加入CD47或者SIRPa抗体,共孵育,CCK8试剂盒显色。结果显示,CD47抗体能够很好的抑制CD47-Fc诱导的Jurkat-CSR细胞死亡,建立的检测方法具有良好的稳定性。




  四、实验方法分析

  宜明昂科进行了该实验方法的重复性、精密度、准确度、线性等项目验证分析。




五、结论

宜明昂科成功将Jurkat细胞CD47基因敲除,同时使其稳定高表达CSR分子;CD47蛋白能够通过”AICD”机制诱导Jurkat-CSR细胞死亡;CD47阻断剂能够抑制CD47蛋白诱导的Jurkat-CSR细胞死亡;建立的检测平台能够很好的用于针对CD47靶点药物筛选,活性分析等。


针对CD47靶点药物的传统体外活性分析方法需利用淋巴细胞分离液从人的外周血分离淋巴细胞,进一步采用磁珠分选方式获取单核细胞,再通过长时间的刺激、培养使其分化为巨噬细胞,才能将其用于研究CD47靶向药促进吞噬肿瘤细胞能力的检测。该方法可操作性低、周期长、成本高、通量低、很难用于药物的放行检测。而我们改造的Jurkat-CSR细胞能够很好的用于CD47靶点药物的筛选、功能分析及放行检测,且具有操作简单、周期短、成本低、易重复等优点。








PD-1/PD-L1通路检测技术平台


一、背景知识

PD-1(程序性死亡受体),是一种重要的免疫抑制分子,为免疫球蛋白超家族,是一个268氨基酸残基的膜蛋白。以PD-1为靶点的免疫调节对抗肿瘤、抗感染、抗自身免疫性疾病及器官移植存活等均有重要的意义。其配体PD-L1也可作为靶点,相应的抗体也可以起到相同的作用。PD-1和PD-L1结合启动T细胞的程序性死亡,使肿瘤细胞获得免疫逃逸。


AICD(Activation-induced cell death)即活化诱导的细胞死亡,激活的效应淋巴细胞在行使效应功能后死亡的现象。通过T细胞-B细胞或T细胞-T细胞之间的FasL(CD95L)Fas(CD95)的结合,启动AICD,使自身反应性T细胞或B细胞被消除。



二、方法介绍

600全讯白菜网址大全,老虎机送免费彩金98,下载app领彩金37具有自主知识产权的Jurkat-CPR细胞株,表达CPR分子,该分子由PD-1的膜外端、CD8 alpha的绞链区、CD28的穿膜区及胞内区、以及CD3z的信号传导区等所组成。


该细胞能与Raji-hPD-L1细胞特异性结合,PD-1/PD-L1靶点药物能阻断Raji-hPD-L1细胞和Jurkat-CPR细胞之间的结合,进一步阻断Raji-PDL1诱导的Jurkat-CPR细胞凋亡。该嵌合蛋白细胞株可以用来检测PD-1/PD-L1靶点阻断剂的细胞生物学活性功能,用于PD-1/PD-L1靶点特异性分子药物(单克隆抗体、基因重组蛋白、靶向性小分子药物等)的筛选。




三、检测流程

饲养Raji-hPD-L1细胞,和PD-1/PD-L1靶点药物一起铺板,加入Jurkat-CPR细胞饲养铺板,共孵育,CCK8试剂盒显色。结果显示,PD-1/PD-L1靶点药物能够很好的抑制Raji-hPD-L1细胞诱导的Jurkat-CPR细胞死亡,建立的检测方法具有良好的稳定性。




四、实验应用分析

宜明昂科进行了该实验方法的稳定性和重复性。并对PD-1/PD-L1靶点药物进行应用,获得比较可信的实验数据。



五、结论

针对PD-1/PD-L1靶点药物的传统体外活性分析方法需利用淋巴细胞分离液从人的外周血分离淋巴细胞,进一步采用磁珠分选方式获取单核细胞,再通过长时间的刺激、培养使其分化为T细胞,才能将其用于研究PD-1/PD-L1靶向药促进T细胞能力的检测。该方法可操作性低、周期长、成本高、通量低、很难用于药物的放行检测。而我们改造的Jurkat-CPR细胞能够很好的用于PD-1/PD-L1靶点药物的筛选、功能分析及放行检测,且具有操作简单、周期短、成本低、易重复等优点。








VEGF/VEGFR通路检测技术平台


一、背景知识

VEGF是血管发育的重要调控因子,并在健康和疾病方面起作用。VEGF是一种分泌的多肽,在质膜上与横跨膜的受体酪氨酸激酶VEGF结合,诱导他们的聚合,激活及膜近侧信号复杂的装配过程。近来的研究表明许多关键的VEGF受体信号过程发生在内皮细胞,被胞内受体运输调控。与质膜上的VEGFR相互作用的指导血管受体,神经素等分子调控VEGFR内吞作用和运输。


AICD(Activation-induced cell death)即活化诱导的细胞死亡,激活的效应淋巴细胞在行使效应功能后死亡的现象。通过T细胞-B细胞或T细胞-T细胞之间的FasL(CD95L)Fas(CD95)的结合,启动AICD,使自身反应性T细胞或B细胞被消除。




二、方法介绍

 600全讯白菜网址大全,老虎机送免费彩金98,下载app领彩金37具有自主知识产权的Jurkat-CVR细胞株,表达CVR分子,该分子由VEGFR1的膜外端、CD8 alpha的绞链区、CD28的穿膜区及胞内区、以及CD3z的信号传导区等所组成。


 该细胞能与VEGF/VEGFR1靶点药物特异性结合,而加入VEGF/VEGFR1靶点药物则可以抑制VEGF对Jurkat-CVR细胞的活化,阻止细胞死亡的发生,进一步阻断Jurkat-CVR细胞凋亡。该嵌合蛋白细胞株可以用来检测VEGF/VEGFR1靶点药物的细胞生物学活性功能,用于VEGF/VEGFR1靶点药物特异性分子药物(单克隆抗体、基因重组蛋白、靶向性小分子药物等)的筛选。




三、检测流程

Jurkat-CVR细胞和VEGF-Fc共同铺板,共孵育,CCK8试剂盒显色。结果显示,VEGF/VEGFR1靶点药物能够很好的抑制VEGF-Fc诱导的Jurkat-CSR细胞死亡,建立的检测方法具有良好的稳定性。




四、实验应用分析

宜明昂科进行了该实验方法的稳定性和重复性。并对VEGF/VEGFR1靶点药物进行应用,获得比较可信的实验数据。



五、结论

针对VEGF/VEGFR1靶点药物的传统体外活性分析方法主要利用HUVEC细胞的增殖来评价。由于HUVEC细胞不能无限扩增使用,在较低代次的细胞才能具有较为理想的响应度。而且该检测方法窗口较小,实验不可控因素多,造成检测结果不稳定,不易重复。我们改造的Jurkat-CVR细胞能够很好的用于VEGF/VEGFR1靶点药物的筛选、功能分析及放行检测,且具有操作简单、周期短、成本低、易重复等优点。


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